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扩展资料
检测基因突变的方法
位于加州Santa Clara地区的一个公司推出一种测定基因突变的技术,具体操作步骤如下:
1 从细胞中提取DNA,分离出目标基因(即要测定的基因),并大量复制;
2 将目标基因切割成片段,每个片段用荧光化学物质标记。将这些标记过的基因片段在芯片上“洗涤”。芯片上已经埋植了数十亿条纤丝,即DNA探针,每一探针有20个碱基。每一标记过的基因片段只和与之相匹配的探针结合,俗称杂交。最后用激光扫描芯片,通过荧光图案的类型读出被测基因片段的顺序;
3 DNA由四种碱基组成,即A、T、C、G。芯片测试被测基因的每一个位置,定出该位置的碱基种类。如果探针与被测基因片段的顺序完全匹配,即按照A-T、C-G配对,这两股DNA就会紧紧地结合在一块。既使这两股DNA中有一组碱基不匹配,这两股DNA也会结合在一块。就是松弛一点,该位置的荧光反映也就暗谈一点。因此DNA链结合松紧的程度可以通过荧光的强弱反映出来,从而反映出被测DNA片段的顺序;
4 由于DNA探针能识别被测基因片段上的特定区域。所以让每一DNA探针测试基因片段上的一个位置。探针前面7个碱基和后面7个碱基分别和基因片段待测区域上游和下游的7个碱基相匹配。探针中间的碱基则用来测定基因片段待测区域的碱基种类;
5 将芯片分成许多小区,每一小区都有设定好的探针。测定被测基因片段上的一个位点需要一组四个小区,因为每一位点的碱基种类的可能性一般只有A、T、C、G四种。目前版本的芯片上有400,000个小区,每一小区中可能埋植上千万根具有特定碱基顺序的探针。
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